Što treba uzeti u obzir pri odabiru pravog mikroskopa za sistem za snimanje živih ćelija

Za uspješno izvođenje eksperimenata snimanja živih ćelija, korištenje pravog pristupa je ključno. Prilikom odabira prikladnog mikroskopa za snimanje vaših živih ćelija, treba uzeti u obzir sljedeće aspekte: Vijabilnost uzorka, brzinu akvizicije slike (vremenska rezolucija) i potrebnu rezoluciju u sve tri dimenzije.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 oznaka) i najniža doza svjetlosti za ekscitaciju je ključna.

Za eksperimente sa živim ćelijama, akvizicija velikom brzinom je često kritična, posebno za proučavanje brzih dinamičkih procesa kao što je posmatranje vezikula. Korištenje optičkih filtera dovodi do ograničenja brzine zbog potrebe za sekvencijalnim slikanjem pri mijenjanju setova filtera za svaku boju, koja se koristi za proučavanje interakcije više komponenti. Skupljanje slika uzastopno zahtijeva više vremena nego istovremeno prikupljanje slike i, kao rezultat, mogu se propustiti brzi pokreti uzorka tokom akvizicije, jer svaka boja ima duži vremenski interval od jedne slike do druge. Osim toga, kada je direktno poređenje između dvije ili više boja od suštinskog značaja, signali su se možda kretali čak i između pojedinačnih akvizicija fluorofora, što otežava interpretaciju podataka.

Dostupno je više tehnologija za dobijanje slika u 3 dimenzije tokom vremena. Izbor sistema zavisi od vašeg eksperimenta i da li vam je veća brzina ili manje osvetljenje uzorka tokom snimanja vaš prioritet pri dobijanju željene 3D rezolucije. Odabir najprikladnijeg sistema tradicionalno je od vas zahtijevao da napravite izbor između sistema za snimanje uživo na bazi kamere ili konfokalnog sistema za snimanje živih ćelija, međutim moderna rješenja mogu pružiti oba modaliteta na integriran način.